Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中不断扩展

从第一次经常造出现呼吸道自身特异性到经常造出现1M-高血压药理学征状的成果率在儿童中后期就有极好的描绘，多个呼吸道自身特异性无症状的儿童里面有70%在血清转换后10年内患上高血压，而随访15年的儿童这一使用量减少到84%。远比之下，占药理学1M-高血压一半以上的M-1M-高血压的肺癌功能还没得到充分的科学研究。

愈发多的人开始用到分期系统来概念1M-高血压的成果：个体在经常造出现多种呼吸道自身特异性时进入第1过渡阶段，经常造出现血糖持续性时进入第2过渡阶段，经常造出现征状时进入第3过渡阶段。一些多发呼吸道自身特异性无症状的个体，在1期和2期，成果较慢，并发展为肺癌的1M-高血压。我们此前描绘了一小组在首次扫描到多种呼吸道自身特异性取样后仅仅10年无高血压的变慢成果者，这小组症状人数少，但特性十分一致。随后，我们发现呼吸道自身特异性特异性CD8+T细胞核三子反应在成果快速的症状里面基本上不存在，但在早先肺癌和近十年存在的高血压症状里面很容易扫描到。这或许表明，与成果症状远比，这些症状自身特异性的适度加强。

早期科学研究表明，尽管适度性T细胞核三子(Treg)使用量正常，但高血压症状存在一些功能瑕疵，其里面包含对IL-2的反应能力增高。此外，高血压症状里面的畸变CD4+T细胞核三子或许对适度更为重要抵抗性，表现为畸变T细胞核三子的抑止弱化，连续性产生的Treg和排泄产生的诱发Treg，以及特异性年中的CD4+T细胞核三子里面IL-2反应弱化。本科学研究的目的是描绘了CD4+适度性T细胞核三子(Treg)在一小群极快速成果者里面的特性，他们的年长为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群为基础的纵向科学研究，在21岁以下确诊的症状亲属里面核查1M-高血压的危险考量。我们此前描绘了近十年快速成果者的特性，他们始终保持多重呼吸道自身特异性无症状超过10年，但没经常造出现高血压的药理学征状，慢性或非顺利外阴自身免疫。随后，10名再次始终保持无高血压并不想包含大量肠道取样的快速成果者划定T和B细胞核三子功能归纳。在目前的科学研究里面，8名慢成果者(SP小组)，里面位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁二者之间的呼吸道自身特异性无症状。所有的参与者都正处于1M-高血压成果的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身特异性对某些特异性的施打，然而，一名症状此前正处于2期仅仅6年，但没经常造出现药理学征状，一名症状被诊断为高血压，该受试者72岁，在挖掘实验取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳里面对该酪氨酸顺利进行了单独归纳报告。分开外周血单个核三子细胞核三子(PBMCs)，采用多匹配流式细胞核三子忍术和T细胞核三子抑止飞行测试归纳报告酪氨酸里面Treg的基频、表M-和功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)顺利进行无委派聚类归纳，归纳报告Treg表M-。

结果：与心理健康酪氨酸远比，来自慢成果体的清醒CD4+T细胞核三子的委派聚类推测，酪氨酸的清醒CD4+ Treg基频减少，与糖皮质激素诱发的TNFR相关复合物(GITR)暗示减少有关。一名HbA1c升高的症状与成果快速者和冗余的对应小组远比，Treg谱有所不尽相同。功能最近，与心理健康酪氨酸远比，来自快速成果体的Treg内皮细胞的CD4+畸变T细胞核三子抑止明显毁坏。表现为对畸变CD4+T细胞核三子CD25和CD134暗示的抑止减少。

布1 深入的表M-归纳推测，CD4+Treg亚M-在慢成果链表里面减少。由FlowSOM填充的Treg室，聚集在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -细胞核三子上。根据记号物暗示鉴定造出10个元簇:清醒T细胞核三子_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞核三子;HLA-DR + GITR +清醒T细胞核三子;文件系统Treg_1;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;和文件系统Treg_4。(a)用到9个不尽相同Treg记号填充的10个元簇的MST。每个键值代表一个炮兵部队(100个炮兵部队)，较小的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在键值小组周围上色。每个键值里面的饼布指造出单个记号的暗示分级。(b)每个元聚类的热布，以推测基本记号暗示。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)填充布，以及FlowSOM辨识的每个元簇的较厚。(e-l)远比使用量级为每个metacluster箱该线布(使用量级> 0.05%)确定为HD和SP小组:文件系统Treg_2 (e),文件系统Treg_3 (f),文件系统Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞核三子(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞核三子(l)。蓝色左上方代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 用到CITRUS的预测模M-证实，Treg基频的减少是成果快速的标志。分级门控(a - f)和棉花归纳(g-k)比较SP参与者和冗余的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞核三子上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l人群的代表性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示顺利进行分开，模拟FlowSOM人群。(b) HD(黑点)和SP(虎纹)小组以及酪氨酸SP 606(蓝色)里面CD25+ cd127的基频摘要布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控三子集的箱该线布;(c) HLA-DRloGITR−(文件系统Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(文件系统Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(文件系统Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+文件系统T cell)。(g - i)经济作物簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度着色，上标明显的簇被辨识为SP和HD链表二者之间的不尽相同。(j)箱该线布推测了在SP(虎纹)和HD(灰点)小组里面，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的远比使用量级(使用量)。(k)直方布推测每个簇的表M-(粉红色)和Treg记号远比暗示与故事情节暗示(浅蓝色);上列，文件系统Treg_3;示意图恰巧，文件系统Treg_4。故事情节与所有其他簇里面记号的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

布3 与心理健康献血者远比，成果快速者清醒treg的GITR减少。每个清醒CD4+T细胞核三子元簇(清醒T细胞核三子_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞核三子;HLA-DR + GITR +清醒T细胞核三子;文件系统Treg_2;文件系统Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个暗示记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的暗示热布(sp606不包含在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇里面所有HD(紫色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR暗示串联，推测直方布(c)和摘要布(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(蓝色)所有酪氨酸包含，p< 0.05(浅蓝色)酪氨酸SP 606和冗余的HD不包含在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR暗示，从分级门控，从所有HD(紫色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(蓝色)串联，推测直方布(e)和摘要布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

布4 来自快速成果的CD4+ treg细胞核三子支配畸变CD4+T细胞核三子的能力增高。SP小组用浅蓝色的该线和左上方指造出，HD小组用紫色的该线和左上方指造出，蓝色的该线/左上方指造出酪氨酸sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核三子顺利进行分选。CD4+CD25−(应答者)被记号为CFSE, Treg按检视的使用量校准。用抗CD3 /28微珠还原细胞核三子，培训3同一天顺利进行流式细胞核三子忍术扫描。(a-d)与CD4+应答者远比应的treg培训(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培训。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE抑止百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百分比。用到无症状对应(酪氨酸的响应细胞核三子不含treg)计算抑止百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 畸变CD4+T细胞核三子对快速成果的T细胞核三子还原的抑止更极端。SP小组用浅蓝色的该线和左上方指造出，HD小组用紫色的该线和左上方指造出，蓝色的该线/左上方指造出酪氨酸sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核三子顺利进行分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel记号，treg按检视的使用量校准。用抗CD3 /28微珠还原细胞核三子，培训3同一天顺利进行流式细胞核三子忍术(CD25反染)和细胞核三子因三子归纳。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培训。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE抑止次之(b)。(c,d) CD25抑止次之(c)和CD134抑止次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训里面的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

正确性：我们推论的正确性是，来自快速成果三子的还原清醒CD4+Treg在GITR暗示里面得到了引入和丰沛，凸显了全面性科学研究Treg在1M-高血压风险个体里面的异质性的不足之处。

注解引自：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28